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博科PCR实验室的建设组成

发布时间:2022-06-25      点击次数:128

 

PCR实验室"又叫基因扩增实验室,是核酸检测采样标本的最后目的地,核酸检测采集的咽拭子标本会被送到这里,在这里经过灭活、提取、扩增,最终检验出其阴性或阳性。



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PCR是聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)的简称。是一种分子生物学技术,通过DNA基因追踪系统,能迅速掌握患者体内的病毒含量,其精确度高达纳米级别,精确检测乙肝病毒在患者体内存在的数量、是否复制、是否传染、传染性有多强、是否必要服药、判断药物疗效如何、给临床治疗提供了可靠的检验依据。

 由于该检测方法可以测出普通检验难以检测出的病毒,并具有灵敏度高、特异性高、快捷、对样品要求低等优点,因此被临床医生广为认可,已广泛应用于医院的临床诊断和各防疫检测部门的禽疫病诊断。但是,这种实验需要有能保证绝对安全、配置合理的实验室和非常规范的操作为前提。近年来对临床基因扩增检验实验室的建设越来越得到重视,因为它对检测结果的可靠性、准确性和安全性起到至关重要的作用。

下面对PCR实验室的平面布局、基本流程、污染防控简单介绍:




1

PCR实验室平面布局


普通PCR实验室通常设置分为四个独立的工作区域:试剂制备区、样本制备区、核酸扩增区、产物分析区。

病毒检测采用的荧光定量PCR检测方法中定量PCR实验室通常设置分为三个独立的工作区域:试剂制备区、样本制备区、核酸扩增和产物分析区,即普通PCR实验室后两个区合并。

 

为避免交叉污染,进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行,即只能从试剂制备区→样本制备区→核酸扩增区→产物分析区。


 


 



2

定量PCR实验基本流程


【试剂贮存和准备区】

  该实验区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。试剂和用于标本制作的材料应直接运送至该区,不得经过其他区域。试剂原材料必须贮存在本区内,并在本区内制备成所需的贮存试剂。 


【标本制备区】

   该区域主要进行的操作为临床标本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成。


【反应混合物配制和扩增以及扩增产物分析区】

   该区域主要进行DNA或cDNA扩增和扩增片段的测定。此外,已制备的DNA模板和合成的cDNA(来自样本制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂贮存和制备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。




3

污染的预防与控制


1、工作区域的严格划分  
(1)各个实验区域设置合理; 
(2)各个实验区域要有明显的标记(如醒目的门牌或不同的地面颜色等),以避免各个不同实验区域设备物品、试剂等发生混淆。


2、合理的系统设置  
(1)合理的空调通风系统设置,尽量采用全送全排的空调系统; 
(2)严格的气流压力控制,保证不同的实验区内不同的压力要求。 


3、规范的操作  
(1)临床基因扩增检验实验室的技术人员必须进行上岗培训,经培训合格后才能从事临床基因扩增检验的工作; 
(2)在实验操作过程中,操作者必须戴手套,并经常更换。此外,操作中使用一次性帽子也是一个有效地防止污染的措施; 
(3)清洁工作及时、正确。实验工作结束后,必须立即对本区进行清洁。除常规的消毒液体对表面进行擦拭消毒或紫外线灯的照射消毒外,对一些实验设备还应进行高压消毒处理。 


4、严格的管理  
(1)严格控制进出实验室的人员。与实验无关的人员不得随意进出实验室,有条件的情况下要设置独立的通道和进出整个实验区的门; 
(2)在各个实验区域使用带有明显区别标志的工作服(如不同颜色),当工作人员离开时不得将本区的工作服带至其它区域; 
(3)尽量减少在实验区内不必要的走动以减少交叉污染的可能性。 
(4)扩增产物分析区是最主要的扩增产物污染来源,废液不能在实验室中倾倒,必须经消毒液浸泡消毒后在远离实验室的地方弃掉,用过的吸头等一次性材料也应经消毒液浸泡消毒后统一处理,如焚烧等; 
(5)扩增产物分析区可能会用到某些可致基因突变和有毒物质,应特别注意实验人员的安全防护。 


5、完备的实验室配套设施  
完备的实验室配套设施是保证实验工作的必要条件,应根据各个实验室实验内容的不同配备相应的设备和仪器,如超净工作台、离心机、加样器等。


 

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